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实时荧光定量PCR仪是DNA定量技术的一次飞跃
发布时间:2019-09-22   点击次数:190次
   实时荧光定量PCR仪是DNA定量技术的一次飞跃。运用该项技术,我们可以对DNA、RNA样品进行定量和定性分析。定量分析包括定量分析和相对定量分析。前者可以得到某个样本中基因的拷贝数和浓度;后者可以对不同方式处理的两个样本中的基因表达水平进行比较。除此之外我们还可以对PCR产物或样品进行定性分析:例如利用熔解曲线分析识别扩增产物和引物二聚体,以区分非特异扩增;利用特异性探针进行基因型分析及SNP检测等。
  实时荧光定量PCR技术是在PCR反应体系中加入荧光试剂,利用荧光信号实时检测PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR能够专一、灵敏、快速、高重复性地定量起始模板浓度。
  但是就成熟的microRNA而言,由于其是由21-25个核苷酸组成的小RNA,长度太短,并不能通过传统的实时定量PCR进行检测,但是通过特殊设计的茎环结构的反转录引物,配合实时定量PCR引物及探针可以检测微量样品中microRNA表达水平,也可以用终点PCR法定性检测。
  目前实时荧光PCR技术已经被广泛应用于基础科学研究、临床诊断、疾病研究及药物研发等领域。其中主要的应用集中在以下几个方面:
  1.DNA或RNA的定量分析。包括病原微生物或病毒含量的检测,转基因动植物转基因拷贝数的检测,RNAi基因失活率的检测等。
  2.基因表达差异分析。例如比较经过不同处理样本之间特定基因的表达差异(如药物处理、物理处理、化学处理等),特定基因在不同时相的表达差异以及cDNA芯片或差显结果的确证
  3.基因分型。例如SNP检测,甲基化检测等。
  随着实时荧光定量PCR技术的推广和普及,该技术必然会得到更广泛的应用。
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