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荧光定量pcr仪通过开发的实时分析软件以图表的形式显示
发布时间:2020-12-17   点击次数:32次
  荧光定量pcr仪,由荧光定量系统和计算机组成,用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表。原始数据收集后可以开始分析。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平,这就是分析荧光数据的水平。
  样品到达域值水平所经历的循环数称为Ct值(限制点的循环数)。域值应设定在使指数期的扩增效率为更大,这样可以获得准确,可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的标准品,线性回归分析将产生一条标准曲线,可以用来计算未知样品的浓度。
  PCR是聚合酶链反应的简称,是在短时间内体外大量扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。自动完成聚合酶链反应,提供DNA扩增的温度条件而设计的仪器称为PCR仪。
  PCR仪主要用于DNA片段的放大,可将DNA分子或某一DNA片段于数小时内扩增至十万乃至百万倍,在这过程中主要是3个特征温度循环:
  1、高温变性:把样品加热至90~95℃让DNA模板变性变成单链。
  2、低温退火:让样品的温度迅速下降至50~65℃,引物就可以结合到模板上去。
  3、适温延伸:让样品的温度上升至70~75℃,DNA聚合酶就可以从引物开始用底物复制出新链。
  因此,在PCR反应过程中对温度控制的要求很高,良好的温度控制是PCR仪质量好坏的关键。
  基因扩增的基本要素:
  1、DNA模板:待拷贝的DNA称为模板,它可以是双链DNA也可是单链DNA,Z后扩增得到的产物是双链状态的。
  2、引物:是DNA复制的先锋,就象结晶过程中的晶核,引导DNA的合成。在PCR扩增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。
  3、DNA聚合酶(TaqDNA聚合酶):是DNA复制的动力,在dNTP等底物存在时在引物的引导下沿着模板DNA合成互补的DNA链。
  4、缓冲液:提供DNA合成反应所需的pH,离子强度等环境。
  5、4种单核苷酸:dNTP,提供DNA合成原料。
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