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PCR仪的温度对测结果的准确性存在影响
发布时间:2019-12-18   点击次数:240次
   PCR仪对于样品温度控制的能力对于PCR检测结果的准确性和整体性能十分重要。仪器特异性的参数如升降温速度,维持时间以及算法对于预测样品温度(包括模块温度都是准确控制样品温度的关键。
  PCR仪的升降温速度意味着在一定时间内发生的PCR步骤之间的温度变化,并通过用摄氏度每秒(°C/sec)作为单位。相应的“升温”和“降温”分别代表着热模块的加热和冷却过程。
  由于热量从模块传输至样品需要一定的时间,样品实际的升降温速度会较慢(相对于模块)。因此,对于变温速度的定义需要进行区分和了解。
  最大或峰值模块升降温速度代表在进行升降温过程中非常小的一段时间内模块可以达到的最快温度变化。
  平均模块升降温速度代表在一段更长的时间内温度变化的速度,对于PCR仪的速度会提供一种更具代表性的测量。
  最大样品升降温速度及平均样品升降温速度反映的是样品实际获得的温度。因此,样品升降温速度会为PCR仪的性能以及其对于PCR结果的潜在影响提供一种更为准确的比较。
  由于PCR仪的升降温速度会对PCR结果产生影响,当进行PCR仪更换时,推荐使用带有可模拟之前模式升降温速度程序的仪器以实现更为简易的更换并对PCR的重复性产生最小的影响。
  PCR仪应该被设计成只有样品达到设置的温度后才对相应的步骤开始计时。这样维持时间,或样品维持在设定温度的时间,将会与操作流程中要求的相应循环条件保持得更加准确。
  PCR仪通常会使用复杂的数学算法来确保样品可按照预设程序快速地达到设置的温度。根据反应体系的体积以及所使用的PCR塑料耗材的厚度,算法可对样品的温度以及达到设置温度所需的时间进行预测。依靠这些算法,PCR仪在加热或冷却的过程中,通常会通过一个叫做热模块过冲或下冲的过程让模块温度超出设定值。这样的设置可以确保样品尽快达到设定的温度,而自身不会发生过冲或下冲。
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